PCR məhsulunun təmizlənməsinin məqsədi nədir?

2024 Müəllif: Miles Stephen | [email protected]. Son dəyişdirildi: 2023-12-15 23:33

Təmizləmə DNT-dən a PCR reaksiya adətən aşağı axın istifadə üçün lazımdır və fermentlərin, nukleotidlərin, primerlərin və tampon komponentlərinin çıxarılmasını asanlaşdırır. Ənənəvi olaraq bu, fenol xloroformun çıxarılması kimi üzvi ekstraksiya üsullarından istifadə edərək, sonra etanol çöküntüsü ilə həyata keçirilirdi.

Həmçinin sual yaranır ki, nə üçün PCR məhsullarını təmizləmək lazımdır?

Sənin ehtiyacın var PCR məhsullarını təmizləyin bağlanma müvəffəqiyyətini optimallaşdırmaq üçün istifadə olunmamış primerlərdən, nukleotidlərdən və fermentlərdən xilas olmaq, məhsul of PCR . Kimə saflaşdırmaq the PCR məhsulları , ölçüsü istisna xromatoqrafiyasından istifadə olunur.

Bundan əlavə, PCR-dən sonra nə etməliyəm? Bərpanı maksimum dərəcədə artırmaq üçün tutma qabını iki dəfə 10-20 µL TE və ya su ilə yuyun. Son PCR reaksiya müxtəlif molekulyar biologiya tətbiqləri üçün istifadə edilə bilən bir mikroqrama qədər gücləndirilmiş DNT ehtiva edə bilər. Bu proqramlar qalıq komponentlərinə az və ya çox həssas ola bilər PCR reaksiya qarışığı.

Bir də soruşa bilərsiniz ki, PCR məhsullarını necə təmizləyirsiniz?

Klassik üsullardan istifadə olunur təmiz yuxarı PCR məhsulları ardıcıllıqdan əvvəl gel elektroforezi, etanolun çökməsi və sütun xromatoqrafiyası daxildir. Kifayət qədər effektiv olsa da, bu üsullar bir neçə nümunəni paralel olaraq emal edərkən tez çətinləşə bilər və müxtəlif dərəcələrdə nümunə itkisi nümayiş etdirə bilər.

DNT niyə təmizlənməlidir?

Biz təmiz yuxarı DNT sulu məhlullardan bufer duzlarını, fermentləri və ya aşağı axın tətbiqlərinə təsir edə biləcək digər maddələri çıxarmaq üçün. Nümunələrə PCR reaksiyası daxildir təmiz yuxarı, təmiz qədər məhdudiyyət həzm sonra və təmiz genomik və ya plazmiddən ibarətdir DNT hüceyrə zülalları/zibilləri ilə çirklənmişdir.