Bir ligasyonu çevirmək nə qədər başa gəlir?
Bir ligasyonu çevirmək nə qədər başa gəlir?

Video: Bir ligasyonu çevirmək nə qədər başa gəlir?

Video: Bir ligasyonu çevirmək nə qədər başa gəlir?
Video: Prolonged Field Care Podcast 137: PFC in Ukraine 2024, Noyabr
Anonim

Transformasiya . 1-5 µl arasında əlavə edin bağlama üçün səlahiyyətli hüceyrələrə qarışığı transformasiya . uzadılmış bağlama PEG ilə birlikdə düşməyə səbəb olur transformasiya səmərəlilik (Tez Bağlama Kit). Böyük konstruksiyalar (>10,000 bp) üçün elektroporasiya tövsiyə olunur.

Burada, transformasiya üçün nə qədər bağlama məhsuluna ehtiyacım var?

Transformasiya . 1-5 µl arasında əlavə edin bağlama üçün səlahiyyətli hüceyrələrə qarışığı transformasiya . uzadılmış bağlama PEG ilə birlikdə düşməyə səbəb olur transformasiya səmərəlilik (Tez Bağlama Kit). Böyük konstruksiyalar (>10,000 bp) üçün elektroporasiya tövsiyə olunur.

Sonradan sual yaranır ki, ligasiya və transformasiya nədir? Tipik bir klonlama təcrübəsində tədqiqatçılar əvvəlcə plazmid adlanan dairəvi DNT parçasına gen kimi bir DNT parçasını daxil edirlər. Bu addım məhdudlaşdırıcı fermentlərdən və DNT liqazından istifadə edir və a adlanır bağlama . sonra a bağlama , növbəti addım adlı prosesdə DNT-ni bakteriyalara köçürməkdir transformasiya.

Sonradan soruşula bilər ki, bağlama üçün nə qədər DNT lazımdır?

Effektiv olması üçün vektor + insertin ümumi konsentrasiyası 1-10 Μg/ml arasında olmalıdır bağlama . Vektor: 1:1 və 1:10 arasında olan molyar nisbətləri daxil etmək tövsiyə olunur (1:3 tipikdir). Özünüzdən əmin deyilsinizsə DNT konsentrasiyalarda, müxtəlif nisbətlərdə çoxlu ligasyonlar həyata keçirin.

Liqasiya reaksiyasını nə qədər saxlaya bilərsiniz?

Bağlamalar ola bilər otaq temperaturunda və ya daha sərin (12-16°C hesab edin) bir gecədə və ya hətta bir neçə gün ərzində aparılmalıdır; Əgər sən həqiqətən məşğuluq. Bacararsan həmçinin ligasyonu saxlamaq soyuducuya qoyun və otaq temperaturunda bağlamaya davam etmək üçün daha sonra çıxarın uzun lazım olduğu kimi.

Tövsiyə: