Mündəricat:
Video: Gel elektroforezini necə yükləyirsiniz?
2024 Müəllif: Miles Stephen | [email protected]. Son dəyişdirildi: 2023-12-15 23:33
Nümunələrin yüklənməsi və agaroza gelinin işə salınması:
- Əlavə et yüklənir DNT nümunələrinizin hər biri üçün tampon.
- Qatılaşdıqdan sonra agarozu qoyun gel içinə gel Qutu ( elektroforez vahid).
- Doldur gel qədər 1xTAE (və ya TBE) ilə qutu gel əhatə olunur.
- Diqqətlə yük birinci zolağa bir molekulyar çəki nərdivanı gel .
Bununla əlaqədar olaraq gel elektroforezi üçün nə qədər DNT yükləmək lazımdır?
məbləği Yükləmək üçün DNT quyu başına dəyişəndir. Ən az miqdarda DNT etidum bromid ilə aşkar edilə bilən 10 ng. DNT quyu başına 100 ng-ə qədər olan miqdarlar ləkələnmiş etidium bromid üzərində kəskin, təmiz zolaqla nəticələnəcək. gel.
Bundan əlavə, niyə gel elektroforezində su əvəzinə tampon istifadə olunur? The bufer DNT məhlulunun pH-nı neytral səviyyəyə yaxın saxlamaq üçün lazımdır, çünki o, elektroliz vasitəsilə turşulaşa bilər. Elektrodların yaratdığı elektrik cərəyanları səbəb ola bilər su molekullar H+ ionlarını parçalayır və buraxır.
İnsanlar da soruşurlar, niyə gel elektroforezində marker istifadə olunur?
Kiçik fraqmentlər daha sürətli və buna görə də daha böyük fraqmentlərə nisbətən daha da irəliləyirlər gel . Niyə marker istifadə olunur fraqmentləri keçirərkən gel ? A marker məlum ölçülü DNT fraqmentlərini ehtiva edir. Markerlər hər birində idarə olunur gel digərlərində naməlum fraqmentlərlə müqayisə üçün gel zolaqlar.
Agaroz geldə nə qədər DNT görmək olar?
Ən çox agaroz gelləri 0,7% ilə 2% arasında edilir. 0,7% gel olacaq böyük yaxşı ayırma (qətnamə) göstərmək DNT fraqmentlər (5-10 kb) və 2% gel olacaq kiçik fraqmentlər üçün yaxşı rezolyusiya göstərin (0,2-1 kb).
Tövsiyə:
Sütun xromatoqrafiyasında nümunəni necə yükləyirsiniz?
Sütunu yükləmək üçün: Nümunəni minimum miqdarda həlledicidə həll edin (5-10 damcı). Qalın iynə ilə bir pipet və ya şprisdən istifadə edərək nümunəni birbaşa silisiumun üstünə damcılayın. Bütün nümunə əlavə edildikdən sonra, həlledici səviyyəsinin silisiumun yuxarı hissəsinə toxunması üçün sütunun boşalmasına icazə verin
Gel elektroforezinin məqsədi nədir?
Əsas məqamlar: Gel elektroforezi DNT fraqmentlərini ölçüsünə görə ayırmaq üçün istifadə edilən bir texnikadır. DNT nümunələri gelin bir ucundakı quyulara (girintilərə) yüklənir və onları geldən çəkmək üçün elektrik cərəyanı tətbiq edilir. DNT fraqmentləri mənfi yüklüdür, ona görə də müsbət elektroda doğru hərəkət edirlər
DNT molekullarını ayırmaq üçün gel elektroforezi hansı amildən istifadə edir?
Gel bir ələk kimi fəaliyyət göstərir, müxtəlif DNT molekullarını ölçülərinə görə ayırır, çünki daha kiçik DNT molekulları daha böyük molekullara nisbətən geldən daha tez keçə biləcəklər. DNT-nin keçdiyi geldəki kimyəvi maddə DNT-yə bağlanır və UV işığında görünür
Gel elektroforezində müsbət nəzarət və mənfi nəzarət nədir?
Müsbət və mənfi nəzarət gel elektroforez təcrübəsinin etibarlılığını təsdiqləmək üçün istifadə edilən nümunələrdir. Müsbət nəzarətlər DNT və ya zülalın məlum fraqmentlərini ehtiva edən və gel üzərində xüsusi bir şəkildə köçəcək nümunələrdir. Mənfi nəzarət DNT və ya zülal ehtiva etməyən nümunədir
Kolon xromatoqrafiyası üçün silisium gel necə hazırlanır?
Sütunun hazırlanması: Müvafiq həlledici ilə silikagel məhlulunu hazırlayın və yavaşca sütuna tökün. Dayanma musluğunu açın və bir az həlledicinin boşalmasına icazə verin. Həlledici təbəqə həmişə adsorbanı örtməlidir; əks halda sütunda çatlar əmələ gələcək